各位老铁们好，相信很多人对柱层析是正向还是反向都不是特别的了解，因此呢，今天就来为大家分享下关于柱层析是正向还是反向以及柱层析的四点注意事项的问题知识，还望可以帮助大家，解决大家的一些困惑，下面一起来看看吧！

柱层析是正向还是反向(柱层析的四点注意事项)

本文目录

  1. 层析柱原理和使用方法
  2. 凝胶柱层析操作方法
  3. 凝胶柱层析洗脱顺序

一、层析柱原理和使用方法

1、柱层析操作时，先在圆柱管中填充不溶性基质，形成一个固定相。将样品加到柱子上，用特殊溶剂洗脱，溶剂组成流动相。在样品从柱子上洗脱下来的过程中，根据样品混合物中各组分在固定相和流动相中分配系数不同，经多次反复分配将组分分离。

2、从天然产物中提取、分离和表征生物小分子，是新药研发中获得先导化合物的主要途径之一。层析法（Chromatography）是天然产物分离较为常用的方法之一。层析法较早是根据化合物颜色分离一些植物色素，如今，层析法已经演变成为一种高度敏感的、有效的化合物分离和鉴定方法。柱层析一般包括常压柱层析、中压柱层析和高压柱层析。按照柱填料又可分为柱层析硅胶、离子交换层析、凝胶渗透色谱、疏水作用色谱等，其中以柱层析硅胶（正/反相）使用较为为广泛。与其他层析方法相比，柱层析具有操作简单，经济实惠，样品承载量大等优点，是天然产物分离纯化的方法之一。

二、凝胶柱层析操作方法

1、凝胶柱层析的使用方法大体有一下步骤：

2、(1)预处理称取葡聚糖凝胶（有不同型号）若干克，加入洗脱剂（通常为甲醇或者水，这里以甲醇为例）约20倍凝胶量，置室温下3h进行溶胀，溶胀必须彻底，否则会使上柱后流速变慢，凝胶断裂等。

3、（2）装柱凝胶层析柱的直径与柱长之比一般为1:15

4、（3）加样装好的色谱柱至少要用相当于3倍保留体积的洗脱剂平衡。

5、（4）洗脱与收集洗脱时，用甲醇作洗脱剂，并且要连续不断地进行，使凝胶柱上端保持一定的液层，防止凝胶柱表面的液体流干。

三、凝胶柱层析洗脱顺序

1、凝胶色谱中组分与凝胶之间无作用力，仅仅根据分子量大小来分离。凝胶是有一定孔径散布范围的多孔物质，组分进入色谱柱后，向凝胶的孔中分散，保存程度取决于孔和组分分子的大小。

2、小分子悉数渗入小孔中，在流经色谱柱时阅历的旅程zui长。大分子彻底被排挤在孔外，阅历的旅程zui短。中等大小分子渗入部分较大的孔，而被较小的孔排挤，阅历的旅程居中。故洗脱次序是组分分子大小（分子量）的函数。

好了，文章到这里就结束啦，如果本次分享的柱层析是正向还是反向和柱层析的四点注意事项问题对您有所帮助，还望关注下本站哦！